SW620/5-FU人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株

細(xì)胞介紹

SW620是從一個51歲男性白人組織中分離得到。 由A.Leibovitz等從一個淋巴結(jié)建株。細(xì)胞系主要由無絨毛的小園球細(xì)胞和雙極細(xì)胞組成。它僅合成少量癌胚抗原（CEA）且在裸鼠中有高度的致瘤性。

注：本培養(yǎng)基是不直接添加氟尿嘧啶藥物的。

細(xì)胞特性

（1）來源：結(jié)直腸腺癌，來自轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)

（2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣  貼壁生長

（3）含量：>1×106  細(xì)胞數(shù)

（4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

（5）用途：僅供科研使用

SW620/5-FU人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株

運輸和保存

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。      

1、細(xì)胞培養(yǎng)條件及相關(guān)試劑的配制

（1）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，100%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

（2）準(zhǔn)備L15培養(yǎng)基（推薦0009）：優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1% ，可添加5-Fu濃度為：400~1065uM；

注意：

1. 細(xì)胞在傳代和剛復(fù)蘇時較為脆弱，中止液須為不含5-Fu的*培養(yǎng)基，且在細(xì)胞未貼壁期間和貼壁前期需用不含5-Fu的*培養(yǎng)基，待細(xì)胞生長狀態(tài)穩(wěn)定時再根據(jù)需要濃度添加5-Fu。

2.若細(xì)胞生長狀態(tài)較為緩慢時，可適當(dāng)降低5-Fu的濃度，或使用不含5-Fu的*培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的5-Fu濃度。

（3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二．細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

注意：如還有部分細(xì)胞未消化下來，可采用分步消化：

a. 準(zhǔn)備一個無菌的15mL離心管，加入2mL含10%FBS的*培養(yǎng)基；

b.將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打）；

c.向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入1mL 0.25%胰蛋白酶繼續(xù)消化2min左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫落后加入2mL含10%FBS的*培養(yǎng)基中和，中和后的細(xì)胞懸液移入①中的離心管內(nèi)。 

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。